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發布時間:2022.05.12 分類:技術動態 點擊:次
目前,核酸篩檢系統已廣泛用于血制品常規病原體的核酸檢測,極大下降了相干疾病的輸血傳播。但是,在輸血感染性風險中, 血小板軌道交通、高端電子裝備中廣泛使用的細菌污染及相干敗血癥性輸血反應還是辣手的問題。將核酸篩檢技術用于細菌污染檢測還有很多困難,包括:1、細另外菌污染不像特定病原體,沒有統1的標 準品;2、缺少適合的內參質控排除假陽性或假陰性結果;3、核酸擴增聚合酶大多是細菌來在產生火災時源,帶有痕量的細菌核酸成份。
中國科學院蘇州生物醫學工程技術研究所血液免疫學研究中心則提出1種兩重熒光定量PCR方法可提高細菌污染檢測的可靠性:設計1條人工核酸序列 作為內參,其特點是IRC與靶基因共用同1對引物進行擴增,分別用不同熒光探針進行檢測。通過控制IRC份子數到達陽性檢出限,以其 Ct值作為閾值,只有樣本檢測的Ct值小于或等于Ct時,檢測結果才可認定為陽性。1種雙樣本混合的t測驗統計學方法可用于幫助判斷兩個Ct值的大小。IRC還可以包裝成噬菌體,用于監控核酸樣本提取進程。
另外,該兩重熒光定量PCR方法可通過分別檢測細菌的DNA與RNA,計算不同Ct的比值,能判斷細菌是處于生長繁殖期 或已是死菌,從而幫助判斷血制品滅活的效果。該方法不但能用目前我國廢舊塑料回收利用率不高于血制品細菌污染檢測,理論上也能開發成其他外源基因核酸定量檢測的有效方法。